Технология трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота (часть 8)
29-01-2012, 18:43
В течение последних трех десятилетий интенсивно разрабатывались вопросы глубокого замораживания биообъектов в целях длительного сохранения их жизненных свойств. В результате к середине 70-х годов было осуществлено успешное замораживание эмбрионов. Положительный результат замораживания — оттаивания был получен при использовании эмбрионов на стадии морулы и бластоцисты.
Методика сохранения эмбрионов включает в себя очень медленное охлаждение, замораживание и оттаивание. Однако в настоящее время современная технология предусматривает как быстрое оттаивание, так и две ступени замораживания.
Медленная скорость (0,1° в минуту) замораживания в интервале — 36-60 °С теоретически позволяет максимально ограничить выделение внутриклеточной жидкости отдельными бластомерами, что позволит избежать или видоизменить образование внутриклеточного льда. Такая скорость замораживания вызывает необходимость медленного оттаивания в этом же интервале. Слишком быстрое оттаивание приводит к повреждению клеток из-за неадекватности времени, необходимого для восстановления внутриклеточной воды, и, как следствие, ведет к возрастанию осмотического стресса (внутриклеточная гипертония) и повреждению внутриклеточных мембран и самих клеточных структур.
Ампулу с эмбрионами, находящимися в специальной среде, помещают в охладитель, температура которого понижается с заданной скоростью. При достижении точки замерзания среда, как правило, замерзает не сразу, так как происходит некоторое переохлаждение, обусловленное отсутствием в среде кристаллизационных центров, на которых могли бы образовываться кристаллы. Лишь через несколько градусов ниже точки замерзания наблюдается внезапное образование кристаллов. Высвобождающееся при этом кристаллизационное тепло быстро поднимает температуру до точки замерзания, что создает большой перепад температуры между средой и охладителем и приводит снова к быстрому охлаждению среды на несколько градусов ниже уровня температуры охладителя.
Методика сохранения эмбрионов включает в себя очень медленное охлаждение, замораживание и оттаивание. Однако в настоящее время современная технология предусматривает как быстрое оттаивание, так и две ступени замораживания.
Медленная скорость (0,1° в минуту) замораживания в интервале — 36-60 °С теоретически позволяет максимально ограничить выделение внутриклеточной жидкости отдельными бластомерами, что позволит избежать или видоизменить образование внутриклеточного льда. Такая скорость замораживания вызывает необходимость медленного оттаивания в этом же интервале. Слишком быстрое оттаивание приводит к повреждению клеток из-за неадекватности времени, необходимого для восстановления внутриклеточной воды, и, как следствие, ведет к возрастанию осмотического стресса (внутриклеточная гипертония) и повреждению внутриклеточных мембран и самих клеточных структур.
Ампулу с эмбрионами, находящимися в специальной среде, помещают в охладитель, температура которого понижается с заданной скоростью. При достижении точки замерзания среда, как правило, замерзает не сразу, так как происходит некоторое переохлаждение, обусловленное отсутствием в среде кристаллизационных центров, на которых могли бы образовываться кристаллы. Лишь через несколько градусов ниже точки замерзания наблюдается внезапное образование кристаллов. Высвобождающееся при этом кристаллизационное тепло быстро поднимает температуру до точки замерзания, что создает большой перепад температуры между средой и охладителем и приводит снова к быстрому охлаждению среды на несколько градусов ниже уровня температуры охладителя.